CFSE , ou carboxifluoresceína - succinimidil - éster , é uma solução de coloração fluorescente de células usadas em estudos de migração linfocitária . Os linfócitos são as células brancas do sangue que têm a capacidade de sair da corrente sanguínea para capturar microorganismos alienígenas , desempenhando um papel importante na defesa imunológica . CFSE também pode ser utilizado para rotular os timócitos e células embrionárias , de acordo com a " Immunology and Cell Biology . " Linfócito humano Protocolo de Coloração

Técnicos preparar uma suspensão de células com 20 milhões de células por ml em 0,1 por cento de soro fetal bovino ( FBS ) e tampão fosfato salino ( PBS ) . Eles acrescentam CFSE e deixe sentar suspensão por oito minutos , de acordo com a Universidade de Kansas Medical Center. Pré -aquecido FBS é então adicionado e as células são incubadas em banho-maria a 98,6 graus centígrados durante 10 minutos. As células são em seguida centrifugados durante cinco minutos , o sobrenadante é descartado e as células são lavadas numa solução de 2 por cento de FBS /PBS três vezes . As células são fixadas com paraformaldeído .

Simplificado CFSE Coloração Protocolo

Técnicos amostras de sangue centrífuga , eliminando as células vermelhas. Depois, lavam os linfócitos com PBS para remover a proteína livre . Para ser capaz de observar a divisão celular , após dois dias , CFSE é adicionado em concentrações baixas durante oito minutos , depois a reacção é bloqueada com soro fetal de vitelo . As células são lavadas duas vezes com PBS /FCS . Este protocolo pode ser utilizado em "in vivo" ou " in vitro " experimentos , segundo o The Lab Hedrick na Universidade da Califórnia.
Protocolo para a Ativação de Naive Células T CD8 em vitro

uma célula T ingênuo é um linfócito que diferenciou na medula óssea. Este tipo de célula é considerado maduro , e as células respondem a novos agentes patogénicos que o sistema imunitário nunca encontradas . Técnicos incubar amostras de vírus da gripe e de células no gelo por 30 minutos, centrifugar e continuar o processo de incubação de 18 horas a 98,6 graus centígrados. Mais tarde , as células são coradas com CFSE e os resultados são analisados ​​sob citometria de fluxo.