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Luciferase Reporter Assay Protocolo
A luz produzida por vaga-lumes tornou-se uma ferramenta importante para os biólogos moleculares . Firefly bio- luminescência - produzido pela conversão de luciferina luciferase para oxiluciferina - foi identificado pela primeira vez , caracteriza-se e desenvolveu-se o ensaio de luciferase por pesquisadores da Universidade da Califórnia, em San Diego, em 1986. Definições

ácido desoxirribonucleico (DNA) serve como o material genético das células . A sequência do promotor de ADN controla a expressão de um gene - uma sequência de ADN que produz uma proteína específica . Como uma peça separada de ADN , um plasmídeo contém um gene , tal como a luciferase .
Métodos

Um cientista constrói um plasmídeo que contém um promotor e o gene da luciferase . Este plasmídeo é transfectadas - introduziu biologicamente , quimicamente ou mecanicamente - em uma célula animal, e depois que uma célula arrombado para liberar qualquer luciferase produzido. Luciferina é adicionada a esta mistura de células , e a quantidade de bio - luminescência produzida pela conversão da luciferase de luciferina para oxiluciferina é medido . Os kits e protocolos detalhados encontram-se comercialmente disponíveis para este ensaio .
Utiliza

A quantidade de bio - luminescência produzida neste ensaio é proporcional à força do promotor , e , portanto, serve como um método útil para a comparação de diferentes promotores . Isto torna-se importante em ambientes industriais , os promotores como otimizados poderia aumentar a quantidade de proteína produzida na mesma quantidade de tempo.

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