LacZ é um gene bacteriano que produz a enzima beta - galactosidase , o qual quebra a lactose em glucose e galactose . A enzima também cliva o composto X - gal , o que produz uma cor azul que os biólogos moleculares usar como um marcador ou repórter para rastrear a presença do gene de LacZ em células . Transfecção

Cientistas ligar o gene LacZ com um gene de interesse , tais como a insulina , com um fragmento de ADN de um plasmídeo chamado . Eles usam métodos de transfecção química ou elétrica para obter o plasmídeo em células. As células são ensaiadas para a expressão de LacZ de beta - galactosidase , o qual também irá marcar a presença do gene da insulina .
Fixação

Após a transfecção , as células são cultivadas em uma placa de Petri de plástico . Para o ensaio , o meio de crescimento é removido e as células são lavadas com solução salina tamponada com fosfato ( PBS ) . A solução de fixação fresco de formaldeído , metanol e glutaraldeído é usada para fixar as células durante dois minutos . O fixador é removido e as células são lavadas mais uma vez com PBS .
X - gal

uma solução corante fresco que contém ferro- X - gal , potássio cianeto de potássio e cianeto de ferro- é adicionado às células durante a noite . As células são novamente lavadas com PBS , e se o gene LacZ está presente , a beta - galactosidase clivada terá o X - gal e as células será azul .