Cientistas rotineiramente monitorar o crescimento celular. Pode ser uma peça de manutenção regular da pilha , ou como parte de uma experiência . Por exemplo , uma experiência pode ser configurado para comparar os efeitos de três diferentes drogas sobre o crescimento de células . Neste caso , quatro frascos de células na mesma concentração são definidas acima ; uma sem qualquer droga , como um controlo , e uma para cada uma das três drogas . As células são removidas a partir do frasco , a intervalos regulares , tais como diariamente , contado e registado . Os números de células estão representados num gráfico em função do tempo , o impacto das drogas sobre o crescimento celular pode ser comparado com o controlo . Coisas que você precisa
células em suspensão
Tubos de ensaio
Pipetas
médio Crescimento
hemocitômetro
capa escorregar
contagem mão contra
papel Lens
Trypan azul
Microscópio
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células
um

Redemoinho células suavemente para obter uma suspensão uniforme. Retirar um volume de células , tais como 1,0 mililitro ( ml ) , com uma pipeta e transferir para um tubo de ensaio . Diluir as células para dar 100.000 a 500.000 células por ml - este deve fornecer os aproximadamente 100 células necessárias para a significância estatística quando a contagem
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Diluir as células , se necessário , pela adição de 9,0 ml de meio para a . 1,0 ml de células . Misture e registrar a diluição. Se as células são ainda demasiado concentrada , retirar 1,0 ml de células diluídas para um novo tubo , adicionar 9,0 ml de meio , misturar e gravar a diluição . As células de mamíferos crescem normalmente na gama de 100.000 a 5.000.000 por ml , de modo 0-2 diluições deve ser suficiente .
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Misturar as células a partir da diluição final . Remover um volume pequeno , como 0,1 ml , e coloque em um novo tubo . Adicionar um volume igual de azul de tripan , mixar e gravar a diluição. As células mortas ocupam azul de tripan e aparecerá azul sob o microscópio.
Contando
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lustrar o hemocitômetro e lamela com papel de lente , e local lamela na grade hemocytameter . Adicionar uma gota de células diluídas a - forma de V ao lado da grelha . As células se movem sob a lamela por ação capilar.
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Coloque o slide no microscópio , o foco na grade e usar contador marcador mão para contar os viáveis ​​, não azuis, células. As células não devem sobrepor-se , se muito denso , executar outra diluição. Se as células são muito diluída , preparar uma amostra mais concentrada.
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Retire o hemocitômetro , limpo, recarregar, e contar novamente. Conte cada amostra de células três vezes.
Cálculo
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Calcule o número de células por ml . A grade hemocitômetro é dividida em 9 quadrados grandes , cada uma com um volume de 0,1 ml .
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Divida o número de células contadas pelo número de grandes praças usados ​​(nove , se você usar toda a rede ) e multiplicar por 10.000 para obter células por ml . Multiplique pelo fator de diluição (s) para a concentração final.
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registrar a data , amostra, contagem de células , fatores de diluição e número final de células por ml. Prepare um gráfico do número de células em função do tempo para mostrar o crescimento celular.